人γ谷氨酰转移酶(GGT) ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中人γ谷氨酰转移酶(GGT)含量。预先将GGT特异性单克隆抗体包被于微孔板固相载体，加入待测样本后，样本中的GGT抗原可与包被抗体特异性结合，洗去未结合杂质后，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的GGT检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体夹心免疫复合物。再次洗涤去除游离酶标抗体，加入TMB底物显色，在酶的催化下底物生成蓝色产物，经终止液终止反应后变为黄色。最终通过酶标仪测定450nm波长下吸光度值，吸光度大小与样本中GGT浓度呈正相关，对照标准曲线即可精准计算样本含量。
产品参数：

‌灵敏度：≤0.5U/L

检测范围：1U/L–80U/L

反应时间：样本孵育 60min，二抗孵育 30min，底物显色 15min，终止后立即读数，总流程约 110min

显色系统：TMB 单组分显色液，HRP 催化显色

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

特异性：仅识别人源 GGT，与谷丙转氨酶、谷草转氨酶无交叉反应

重复性：板内 CV＜6%，板间 CV＜8%

注意事项：血清样本避免反复冻融，溶血、黄疸严重样本会干扰检测结果
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 30min，取出酶标板，设定空白孔、标准品孔、待测样本孔，每孔做好标记。

标准品孔依次加入梯度稀释完成的 GGT 标准品 50μL；待测样本孔加入稀释后待测血清 / 组织上清样本 50μL；空白孔不加任何液体。

所有孔位直接加入一步法酶结合工作液 50μL，轻柔震荡酶标板混匀，封板膜密封板孔。

37℃恒温孵育 60min，期间避免酶标板晃动、阳光直射。

弃去孔内全部液体，每孔用洗板洗涤液加满洗涤，静置 30s 后拍干，重复洗板 5 次，孔内无残留水渍。

每孔先后加入显色液 A、显色液 B 各 50μL，避光轻柔混匀，37℃避光显色 15min。

每孔立即加入终止液 50μL 终止显色反应，10min 内使用酶标仪在 450nm 波长读取各孔 OD 值，依据标准曲线计算样本 GGT 浓度。