人大肠菌素(colicin)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板表面固定人大肠菌素特异性抗体，标准品与待测样本中的colicin抗原与固相抗体特异性结合，孵育完成后洗除游离成分，加入酶标记检测抗体形成免疫复合物，通过酶催化底物产生显色反应，终止后测定吸光度，结合标准曲线计算样本中大肠菌素的含量。
基本参数‌：

产品名称：人大肠菌素(colicin)ELISA试剂盒

英文名称：colicin  Elisa Kit
货号：Y-E584

规格：48T/96T

灵敏度：下限 0.06μg/mL

检测范围：0.15μg/mL - 6μg/mL

反应时间：室温结合 90min，酶标记物 50min，显色 21min，全程 161min

显色系统：HRP 催化 TMB 显色，酸性终止

检测波长：450nm

特异性：专一结合大肠菌素蛋白，与普通大肠杆菌菌体蛋白无交叉

重复性：板内 CV＜8.0%，板间 CV＜9.5%

注意事项：细菌上清样本需过滤除菌后再检测，操作避免样本间交叉污染
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温平衡 27min，配制 1× 洗涤液，取出酶标板条，未使用部分密封冷藏。

梯度稀释大肠菌素标准品，每孔加 50μL；菌体上清待测样本稀释后加样 50μL；空白孔加稀释液。

所有微孔加入 HRP 酶标抗体 100μL，封板膜密封，轻摇混匀体系。

37℃恒温避光孵育 52min，放置于水平台面避免倾斜漏液。

手动洗板 5 次，每次洗涤液浸润微孔 38s，甩干废液后拍净残留液体。

避光添加显色 A 液、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 15min。

滴加终止液终止反应，450nm 波长测定吸光值，对照标准曲线计算大肠菌素浓度。
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