人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板预先固定人α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）特异性捕获抗体，加入待测样本与梯度标准品后，其中的α-SMA抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质后，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体构建夹心免疫结构，经洗涤纯化、酶促显色、终止反应后，检测吸光度值即可精准定量样本中α-SMA的浓度水平。
产品参数：

‌1.灵敏度：检出限≤2.2ng/mL

2.检测范围：4.4ng/mL - 140.8ng/mL

3.反应时间：抗原捕获 86min，酶标二抗 51min，显色 19min

4.显色系统：预混型即用 TMB 显色液

5.检测波长：450nm+620nm

6.特异性：特异性结合平滑肌 α-SMA，横纹肌、胞质肌动蛋白无交叉识别

7.重复性：批内 CV≤6.5%，批间 CV≤9%

8.注意事项：固定组织提取液需彻底去除多聚甲醛残留，甲醛会封闭抗原表位
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

1. 试剂盒组分室温静置 30min 平衡温度，稀释浓缩洗涤液，冻干标准品复溶后梯度稀释，细胞上清样本离心备用。

2. 排布空白孔、标准品梯度孔、样本孔，标准孔加标准品 50μL，样本孔加上清待测样本 50μL，空白孔空置不加液。

3. 非空白孔每孔添加酶标记一抗工作液 100μL，封板膜封严板口，小幅晃动酶标板混匀体系。

4. 37℃恒温孵育 60min，孵育过程酶标板不可挪动移位。

5. 揭膜倒出废液，洗涤液浸泡 30s 甩干，洗板 5 次，滤纸彻底吸干孔内残留洗涤液。

6. 避光滴加显色液 A、B 各 50μL，轻微震荡混匀，37℃避光显色 15min。

7. 加入终止液终止显色反应，酶标仪快速读取 OD 值，绘制标准曲线计算 α-SMA 蛋白浓度。