人促有丝分裂因子(MF/MPF)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，微孔板表面包被人促有丝分裂因子特异性捕获抗体，待测样本中的MF/MPF抗原可与固相抗体特异性结合，洗涤后加入酶标记检测抗体构建夹心复合物，通过酶催化底物产生显色反应，终止反应后测定吸光度，对照标准曲线即可定量检测样本中促有丝分裂因子的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人促有丝分裂因子(MF/MPF)ELISA试剂盒

英文名称：MF/MPF ELISA Kit
货号：Y-E2664

规格：48T/96T

灵敏度：检出下限 0.15U/L

检测范围：0.4U/L - 16U/L

反应时间：孵育 95min，酶结合物 55min，显色 22min，全程 172min

显色系统：HRP 介导 TMB 显色，硫酸终止

检测波长：450nm/630nm 双波长

特异性：特异性识别 MPF 复合物亚基，不与周期蛋白家族其他亚型强结合

重复性：板内 CV＜7.8%，板间 CV＜9.3%

注意事项：细胞裂解样本需充分离心去除细胞碎片，所有步骤严格控温室温 22-26℃
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温放置 40min，稀释浓缩洗涤液与标准品稀释液，规划酶标板孔位分区。

各梯度标准品取 50μL 加入对应微孔，细胞上清 / 组织样本稀释后上样 50μL，空白孔补稀释液。

所有孔加入酶结合检测液 100μL，封板膜密封，震荡混匀 25s。

37℃密闭孵育 75min，维持孵育箱温度稳定无波动。

洗板 6 次，每次洗涤液浸泡微孔 30s，彻底弃除废液并拍干板条。

避光加入显色底物 A、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 22min。

终止液终止显色反应，450nm 波长检测吸光度，绘制标准曲线换算 MF/MPF 浓度。
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