大鼠一氧化氮(NO)ELISA试剂盒

本试剂盒采用酶联免疫吸附比色检测原理，基于一氧化氮（NO）特异性生化反应与酶显色体系结合，样本中的一氧化氮可与试剂盒特异性试剂发生反应，结合酶催化底物显色，通过检测吸光度值，对照标准曲线定量测定大鼠样本中一氧化氮的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限0.1μmol/L，可精准检测大鼠血清、组织上清微量NO含量

检测范围：0.2μmol/L - 100μmol/L，适配大鼠氧化应激、血管功能相关检测

反应时间：全流程80分钟，小分子物质反应快速稳定

保存条件：2-8℃密封保存，试剂避免光照氧化，浓缩液防止结晶

有效期：未开封有效期6个月，短期储存性能稳定

特异性：特异性检测大鼠NO代谢产物，与过氧化物、羟基自由基等氧化物质无交叉反应

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤8%，符合实验检测标准

注意事项：样本采集后立即检测，NO易降解失效；避免样本接触空气久置，减少氧化损耗；严格控制显色时间，保证结果准确。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂室温放置 30min，稀释浓缩洗涤液，大鼠体液样本离心取上清稀释备用，酶标板标记对照与样品孔。

标准品孔添加 NO 系列梯度标准液，样本孔加入大鼠待测稀释样本，空白孔添加稀释缓冲液。

一步法加入酶标记反应结合液，封板覆膜包裹酶标板，轻柔摇匀孔内液体。

37℃避光孵育 55min，完成特异性结合反应。

倾倒孔内废液，洗板 5 次，每孔浸泡 30s，彻底拍干微孔。

显色混合液避光显色 16min，统一环境条件显色。

终止液终止反应，混匀后立即读数，换算大鼠样本一氧化氮检测数值。