人α1抗胰蛋白酶(α1-AT)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，微孔板固相载体固定人α1抗胰蛋白酶（α1-AT）特异性捕获抗体，加入待测样本与梯度标准品后，其中的α1-AT抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质后，加入辣根过氧化物酶标记的α1-AT检测抗体，构建免疫夹心复合物，经充分洗涤后进行酶促底物显色，终止反应后检测吸光度，显色深浅与样本中α1-AT浓度成正比，实现定量分析。
基本参数‌：

产品名称：人α1抗胰蛋白酶(α1-AT)ELISA试剂盒

英文名称：α1-AT  Elisa Kit
货号：Y-E917

规格：48T/96T

1.灵敏度：检出下限≤0.15μg/mL

2.检测范围：0.3125μg/mL - 10μg/mL

3.反应时间：样本温育 110min，二抗 60min，显色 25min

4.显色系统：双组份 TMB 显色试剂

5.检测波长：450nm，参考 650nm

6.特异性：与人 α1-AT 高度特异性结合，与胰蛋白酶、糜蛋白酶抑制剂无交叉

7.重复性：批内 CV≤6%，批间 CV≤8.5%

8.注意事项：高脂血样本需离心去除上层脂类，否则孔板易挂壁影响结果
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

1. 试剂盒组分室温回温 31min，稀释洗涤液，冻干标准品复溶后梯度稀释，待测样本混匀备用。

2. 酶标板设置三类孔位，标准孔加梯度标准品 50μL，样本孔加待测样本 50μL，空白孔不加任何试剂。

3. 非空白孔加入酶标记抗体工作液 100μL，封板密封，缓慢摇晃酶标板混匀液体。

4. 37℃恒温孵育 63min，全程避光防止底物提前分解。

5. 揭膜弃液，洗涤液注满每孔浸泡 31s，甩干后洗板 5 次，滤纸吸干板孔水分。

6. 避光加入显色底物 A、B 各 50μL，混匀后 37℃避光显色 13min。

7. 终止液终止显色，立即上机读取 OD 值，通过标准曲线计算 α1-AT 含量。
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