人S100钙结合蛋白A9/钙粒蛋白B(S100A9)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附原理，固相酶标板固定人S100A9特异性捕获抗体，加入梯度标准品和待测生物样本，样本中的S100钙结合蛋白A9与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入HRP标记的S100A9检测抗体，形成夹心免疫复合物，经显色、终止反应后检测吸光度，定量测定样本中S100A9的表达水平。
基本参数‌：

产品名称：人S100钙结合蛋白A9/钙粒蛋白B(S100A9)ELISA试剂盒

英文名称：S100A9 Elisa Kit
货号：Y-E538

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测值≤2.5pg/mL，精准捕捉样本中微量S100A9表达变化

检测范围：20-1200pg/mL，覆盖炎症、氧化应激相关样本浓度区间

反应时间：全程反应时长2.7h，抗原抗体结合充分，检测结果准确

保存条件：2-8℃避光密封保存，所有试剂禁止冻存，复溶标准品短期保存需密封防污染

有效期：未开封有效期6个月，储存不当会导致灵敏度下降、背景升高

特异性：专一性结合人S100A9蛋白，与S100A8、S100B等同家族蛋白无明显交叉反应

重复性：板内变异系数＜9%，板间变异系数＜11%，重复性满足科研实验要求

注意事项：样本采集后及时分离上清，避免细胞杂质残留影响检测；标准品梯度稀释需精准，保证标准曲线R²≥0.99；孵育过程禁止晃动酶标板，防止液体溅出、孔间交叉污染；过期试剂严禁使用；实验耗材一次性使用，避免交叉污染
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂室温放置 31min 回温，稀释洗涤液，冻干标准品溶解静置 11min 后倍比稀释，标记酶标板孔位。

空白对照孔添加稀释液，标准孔依次加入梯度标准品，样本孔加入离心后待测上清样本。

直接向全部微孔加入酶标记抗体工作液，轻摇混匀，封板严密封口。

37℃避光孵育 67min，保持酶标板平放无倾斜。

撕掉封板倒净废液，洗涤液浸泡微孔 37s，洗板 5 次后充分拍干微孔。

加入显色底物，避光 37℃显色 16min，梯度显色无异常。

终止液终止反应，450nm 检测吸光值，换算样本 S100A9 浓度。
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