鱼雌二醇ELISA试剂盒

本试剂盒基于竞争酶联免疫吸附试验原理，固相包被鱼雌二醇特异性抗原，样本中的鱼雌二醇与固相抗原竞争结合有限的雌二醇特异性抗体，结合酶显色体系，样本中鱼雌二醇含量越高，显色强度越低，通过标准曲线拟合，可定量检测鱼类样本中雌二醇的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限0.04pg/mL，可精准检测鱼类微量雌二醇激素含量

检测范围：0.1pg/mL - 100pg/mL，适配鱼类血清、性腺组织、水体生物样本

反应时间：全流程90分钟，激素抗原抗体反应稳定高效

保存条件：2-8℃避光冷藏，禁止冷冻，开封试剂密封保存

有效期：原装有效期12个月，常规储存无失效

特异性：专一识别鱼类雌二醇，与鱼类睾酮、孕酮等性激素无交叉反应

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%，实验稳定性好

注意事项：鱼类样本采集后快速低温冷冻保存，避免激素降解；实验全程避光，底物溶液易氧化，需现用现取；严格控制孵育温度与时间。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂室温放置 30min 配制洗涤液，鱼类血清 / 组织匀浆样本离心取上清稀释，酶标板标记空白、标准品、待测样本孔。

各孔加入对应浓度雌二醇标准品、稀释后鱼源待测样本，空白孔仅添加样本稀释缓冲液，加样避免产生气泡。

一步法加入酶标记雌二醇偶联物工作液，封板密封后震荡混匀 10s。

37℃避光孵育 60min，完成竞争结合反应。

弃液洗板 5 次，每次浸泡 30s，彻底拍干微孔内部残留洗液。

加入 TMB 显色液，室温避光显色 15min，观察颜色梯度变化。

加入终止液混匀，酶标仪检测 OD 值，标准曲线计算鱼类样本雌二醇浓度。