禽脑脊髓炎(AE)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接酶联免疫吸附检测原理，固相载体包被禽脑脊髓炎病毒特异性抗原，样本中若含有禽脑脊髓炎抗体，可与固相抗原特异性结合，再结合酶标二抗催化底物显色，通过检测吸光度数值，对照标准曲线即可定量判定样本中禽脑脊髓炎抗体的含量，实现对禽脑脊髓炎感染情况的检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低可检出禽脑脊髓炎病毒特异性抗体滴度1:80，能够早期筛查隐性感染样本

检测范围：抗体浓度0.5ng/mL - 50ng/mL，适配禽类血清、蛋清样本检测

反应时间：全流程120分钟，抗原抗体孵育时长充足，保障结合充分

保存条件：全套试剂2-8℃避光冷藏保存，酶标板需密封防潮，禁止冷冻冻坏活性组分

有效期：原装未开封有效期12个月，开盖后建议1个月内用完

特异性：专一结合禽脑脊髓炎病毒抗体，与新城疫、禽流感、禽传染性支气管炎等禽类病毒抗体无交叉反应

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%，批次间检测结果一致性高

注意事项：样本采集后需低温离心分离血清，避免污染变质；显色反应需严格控制时间，超时会导致数值偏高；废弃试剂及样本需按生物安全规范处理，避免病原污染。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒试剂室温回温 25min，按配比稀释浓缩洗涤液，拆封酶标板条，标记孔位区分阴性对照、阳性对照、标准品、待检禽血清样本孔。

阴性孔加阴性对照液，阳性孔加阳性对照液，标准孔加系列稀释 AE 抗原标准品，样本孔加入预处理稀释后的禽待测血清，每孔加样体积一致。

一步法直接添加酶标记二抗工作液至全部反应孔，微量振荡器低速震荡 10s 混匀，封板膜严实包裹酶标板边缘。

37℃恒温封闭孵育 45min，全程避光放置，杜绝光照造成酶标记物失活。

倒掉孔中液体，洗板机自动洗板 4 次，无洗板机则手动注满洗涤液静置 25s 后倒扣拍干，确保无游离未结合酶标抗体残留。

依次添加显色液单液混合体系，避光条件下 37℃显色 12min，观察阳性孔明显蓝变、阴性孔基本无色。

加入终止液终止反应，轻微震荡酶标板，酶标仪双波长检测吸光度，依据临界值判定禽脑脊髓炎抗体阴阳性结果。