人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA原理，酶标板微孔固定抗人N-Cad特异性抗体，加入标准品、细胞上清、组织匀浆等待测样本，样本中的N钙黏蛋白与固相抗体特异性结合，洗除非特异性结合杂质后，加入HRP标记的N-Cad检测抗体，形成夹心免疫复合物，经显色、终止反应后检测OD值，定量分析样本中神经钙黏蛋白的表达水平，反映神经细胞黏附与迁移状态。
基本参数‌：

产品名称：人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)ELISA试剂盒

英文名称：N-Cad   Elisa Kit
货号：Y-E032

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测值0.09ng/mL，适配神经组织、肿瘤侵袭相关蛋白检测

检测范围：0.18ng/mL - 25ng/mL，覆盖神经发育、肿瘤转移样本区间

反应时间：实验总时长95分钟

保存条件：2-8℃冷藏保存，包被板防潮避光

有效期：常规储存有效期12个月

特异性：特异性结合N-Cad蛋白，与E-Cad、P-Cad无交叉反应

重复性：板内变异＜7%，板间变异＜8%

注意事项：神经组织样本充分匀浆；避免样本氧化、杂质干扰实验结果
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒组分室温回温 30min，稀释洗涤液；N-Cad 标准品倍比稀释，细胞上清与组织匀浆样本离心取上清。

微孔板分孔加样，标准孔、样本孔各加 100μL，空白孔补稀释缓冲液。

一步法加入酶标记检测抗体 100μL，混匀封口封板。

37℃恒温孵育 61min。

洗板 5 次，洗液浸泡 30s 后充分拍干微孔。

显色底物避光显色 15min。

终止液终止反应，酶标仪 450nm 读值，定量 N-Cad 蛋白浓度。
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