人CD4分子(CD4)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA核心原理，将高特异性人CD4抗体包被于酶标板微孔，孵育时样本及标准品中的CD4抗原与固相抗体特异性结合，加入酶标记配对抗体形成免疫夹心复合物，充分洗板后进行TMB底物显色，终止显色后检测吸光度，根据标准曲线对应关系精准定量样本中CD4分子的含量。
基本参数‌：

产品名称：人CD4分子(CD4)ELISA试剂盒

英文名称：CD4  Elisa Kit
货号：Y-E063

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度0.1ng/mL，超灵敏检测T淋巴细胞表面标志物

检测范围：0.3ng/mL - 14ng/mL，适配免疫血清、淋巴细胞样本定量检测

反应时间：完整实验反应85分钟，检测快速精准

保存条件：全套试剂2-8℃恒温避光保存，严禁冷冻

有效期：原装未开封有效期12个月，开封后25天内使用完毕

特异性：专一识别人CD4分子，不与CD8、CD3等T细胞标志物交叉反应

重复性：板内CV≤4%，板间CV≤6%，免疫标志物检测稳定性极佳

注意事项：样本采集后低温保存，避免T细胞凋亡导致CD4分子流失，实验全程无菌操作
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂室温回温 31min，稀释浓缩洗涤液，配制 CD4 梯度标准液，标记酶标板各类检测孔位。

标准品孔加入 50μL 梯度浓度标准品，样本孔加入 50μL 淋巴细胞悬液上清样本，空白孔补稀释液。

所有孔加入 100μL 一步法酶结合预混液，封板避光 37℃孵育 57min。

弃废液，洗涤液浸泡洗板 5 次，单次 30s，充分拍干板内残留洗液。

每孔加入显色底物 90μL，37℃避光显色 16min。

逐孔添加 50μL 终止液，摇晃混匀终止酶促反应。

酶标仪 450nm 检测 OD 值，标准曲线法定量 CD4 分子含量。
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