人cAMP反应元件结合蛋白(CREB)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，将CREB特异性捕获抗体包被于酶标板微孔，孵育过程中样本内的CREB抗原与固相抗体特异性结合，随后加入酶标记检测抗体构建夹心免疫结构，洗涤去除杂质后进行底物显色，终止反应后测定吸光度，依据标准曲线定量检测样本中cAMP反应元件结合蛋白的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人cAMP反应元件结合蛋白(CREB)ELISA试剂盒

英文名称：CREB ELISA Kit
货号：Y-E3504

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出浓度0.09ng/mL，超灵敏检测信号通路核蛋白

检测范围：0.25ng/mL - 11ng/mL，适配细胞、组织CREB蛋白定量检测

反应时间：全程反应90分钟，信号蛋白抗原抗体结合高效稳定

保存条件：抗体、酶结合物2-8℃避光冷藏，标准品低温密封保存

有效期：未拆封有效期8个月，开封后15天内使用完毕

特异性：专一识别人CREB蛋白，无同源转录因子交叉反应，特异性强

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%，信号通路蛋白检测重复性良好

注意事项：样本需避免磷酸化蛋白降解，全程低温操作，显色时间精准把控，保证数值准确
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒全部试剂室温平衡 32min，稀释洗涤缓冲液，倍比稀释 CREB 标准品，标记酶标板标准、样本、空白孔。

标准孔添加 50μL 梯度标准品，样本孔上样 50μL 核蛋白提取待测样本，空白孔补加稀释液。

每孔加入 100μL 一步法酶标记抗体工作液，封板膜密封，37℃避光孵育 60min。

揭膜弃液，洗涤液加满洗板 4 次，每次浸泡 40s，拍干板内液体。

每孔加入 TMB 显色液 95μL，37℃避光显色 17min。

滴加 50μL 终止液混匀终止显色。

双波长酶标仪检测 OD 值，定量样本 CREB 蛋白浓度。
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