扁豆凝集素(LCA)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，将扁豆凝集素（LCA）特异性捕获抗体固定于酶标板固相表面，孵育加入的样本、标准品中的LCA抗原与固相抗体特异性结合，洗板后加入酶标记特异性检测抗体，构建稳定的抗原抗体夹心复合物，经底物显色、终止反应后，吸光度数值与样本中LCA含量成正比，依据标准曲线可定量检测样本中扁豆凝集素的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测值0.1μg/mL，高灵敏度适配扁豆凝集素微量定量分析。

检测范围：0.2μg/mL - 120μg/mL，覆盖植物提取、生物结合实验中LCA浓度区间。

反应时间：总实验时长85分钟，两步温育反应合计60分钟，显色25分钟。

保存条件：2-8℃恒温避光保存，开封后酶标板单独密封存放。

有效期：未开封有效期12个月，批次稳定性良好。

特异性：专一靶向扁豆凝集素，与豆科其他凝集素无交叉免疫反应。

重复性：板内CV≤5.5%，板间CV≤7.5%，平行实验数据差异小。

注意事项：样本酸碱度需调节至中性，过酸过碱会破坏凝集素结构，影响检测结果。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温静置 22min，按说明书配比稀释浓缩洗涤液，标记酶标板孔位组别。

倍比稀释标准品制备浓度梯度，待测样本上清稀释处理，每孔加 60μL 样本 / 标准液。

直接添加酶标抗体工作液至各孔，覆膜封闭，防止液体蒸发影响结果。

36℃避光孵育 72min，固相载体捕获目标 LCA 并结合酶标复合物。

洗板 5 次，每次洗涤液浸泡 40s 后拍干，彻底清洗非特异性吸附杂质。

避光添加显色 AB 液各 50μL，混匀后 37℃显色 19min。

终止液终止反应，15min 内 450nm 测吸光度，依据标准曲线计算凝集素含量。