大鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，酶标板微孔预先包被大鼠TFR/CD71特异性抗体。检测孵育阶段，样本、标准品中的大鼠转铁蛋白受体抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离组分后，加入HRP标记的检测抗体，构建稳定的免疫夹心结构。经TMB底物显色、终止液终止反应后，微孔溶液吸光度与样本中TFR/CD71浓度呈正相关，对照标准曲线可精准定量其表达含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.3ng/mL

检测范围：0.6ng/mL - 100ng/mL

反应时间：总反应130分钟（孵育70min、酶孵育30min、显色30min）

保存条件：2-8℃避光冷藏，核心试剂防冻保存

有效期：12个月

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数Logistic拟合，R²≥0.991

注意事项：溶血样本会干扰检测，需选用清澈无溶血血清样本
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

1. 浓缩洗涤液配制工作洗涤液，试剂室温平衡 30min，细胞裂解样本离心取上清，标记酶标板空白、标准、样品孔。

2. 标准品孔加入梯度 CD71 标准品 50μL，样本孔加入 50μL 裂解上清液，空白孔添加稀释液。

3. 全部孔加入酶标记抗体液 100μL，封板密封，37℃孵育 62min。

4. 洗板 6 轮，每轮浸泡 30s，弃液后彻底拍干微孔内残留液体。

5. 避光依次加入显色 A、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 14min。

6. 加入终止液 50μL 终止显色，摇晃混匀。

7. 450nm 读取 OD 值，标准曲线换算转铁蛋白受体含量。