大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术，酶标板微孔预先包被纯化的大鼠TRAIL-R4特异性抗体。孵育反应时，样本、标准品中的大鼠TRAIL-R4抗原可特异性结合于固相抗体表面，洗涤去除未结合物质后，加入HRP标记的TRAIL-R4二抗进行孵育结合。随后进行TMB底物显色反应，产物颜色深浅与样本中TRAIL-R4浓度正相关，终止反应后检测吸光度，依据标准曲线即可定量测定样本中目标蛋白含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤3.0pg/mL

检测范围：6pg/mL - 240pg/mL

反应时间：总反应120分钟（孵育60min、酶孵育30min、显色30min）

保存条件：2-8℃冷藏避光，禁止冻融

有效期：12个月

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数拟合标准曲线，R²≥0.990

注意事项：终止液添加量需统一，保证所有孔显色终止一致
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。

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实验操作流程：

1. 试剂室温平衡 30min，配制洗涤工作液，待测样本避免高温处理，按需拆取酶标板条，剩余密封冷藏。

2. 标准品孔加入系列稀释 TRAIL-R4 标准品 50μL，样本孔加 50μL 待测液，空白孔添加稀释缓冲液。

3. 每孔加入酶标记工作液 100μL，封板膜密封，震荡混匀 10s，37℃孵育 59min。

4. 洗板 6 次，单次浸泡 30s，弃液后彻底拍干微孔。

5. 避光加入显色 A、B 液各 50μL，37℃避光显色 17min。

6. 加入终止液 50μL 充分混匀终止反应。

7. 450nm 波长读数，对照标准曲线得到样本 TRAIL-R4 数值。