大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将大鼠TRAIL-R1特异性抗体包被于酶标板微孔内。实验孵育阶段，样本、标准品中的大鼠TRAIL-R1抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合组分后，加入HRP标记的TRAIL-R1检测抗体，构建特异性免疫复合物。后续通过TMB底物催化显色，有色产物的吸光度与样本中TRAIL-R1含量成正比，终止反应后检测吸光度，对照标准曲线即可定量检测目标蛋白浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤3.0pg/mL

检测范围：6pg/mL - 200pg/mL

反应时间：总反应120分钟（孵育60min、酶孵育30min、显色30min）

保存条件：2-8℃冷藏避光，严禁冷冻

有效期：12个月

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数Logistic拟合，R²≥0.990

注意事项：凋亡相关样本需及时处理，避免蛋白降解，保证检测准确性
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

1. 试剂盒全部组分室温放置 30min，配制 1× 洗涤缓冲液，组织上清样本离心去除沉淀，拆分酶标条。

2. 标准品孔加入梯度 TRAIL-R1 标准品 50μL，样本孔加入 50μL 待测上清，空白孔加稀释液。

3. 每孔加入酶标记结合液 100μL，封板密封，混匀后 37℃孵育 61min。

4. 弃净孔内液体，洗板 5 轮，每轮浸泡 30s，倒扣拍干微孔。

5. 避光依次添加显色 A、B 液各 50μL，37℃避光显色 13min。

6. 加入终止液 50μL / 孔，摇晃酶标板终止反应。

7. 酶标仪 450nm 检测，拟合标准曲线测算 TRAIL-R1 含量。