大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，酶标板微孔包被有高特异性大鼠TNF-α单克隆抗体。孵育反应时，样本、标准品中的大鼠TNF-α抗原与固相抗体特异性结合，洗涤洗除未结合杂质后，加入HRP标记的TNF-α检测抗体，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”夹心复合物。后续经TMB底物显色、终止液终止反应，吸光度数值与样本中TNF-α含量呈正相关，通过酶标仪检测读数并对照标准曲线，即可定量检测大鼠TNF-α的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤1.0pg/mL

检测范围：5pg/mL - 200pg/mL

反应时间：总反应120分钟（孵育60min、酶孵育30min、显色30min）

保存条件：2-8℃避光冷藏，严禁冷冻，避免细胞因子失活

有效期：12个月

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数Logistic拟合，标准曲线R²≥0.993

注意事项：样本禁止反复冻融，全程避光操作，严格把控孵育温度与时间
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。

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实验操作流程：

1. 试剂室温放置 30min，配比稀释洗涤液，血清样本常温解冻离心，酶标板按实验分组标记孔位。

2. 标准品孔加入梯度稀释 TNF-α 标准品 50μL，样本孔加 50μL 待测样本，空白孔加稀释液。

3. 各孔加入酶标记工作液 100μL，覆膜封板，37℃恒温孵育 60min。

4. 洗板 5 次，每孔注满洗涤液浸泡 30s，甩干拍干微孔。

5. 避光加显色 A、B 液各 50μL，轻柔混匀，37℃避光显色 12min。

6. 每孔加入终止液 50μL，混匀终止酶促反应。

7. 450nm 检测 OD 值，根据标准曲线计算 TNF-α 浓度。