大鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒

本试剂盒以双抗体夹心酶联免疫吸附技术为检测核心，预先将大鼠NGAL特异性抗体包被于酶标板微孔表面。实验孵育阶段，样本与标准品中的大鼠NGAL抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离物质后，加入HRP标记的NGAL二抗进行孵育，构建特异性免疫夹心结构。通过TMB底物的酶促显色反应产生有色产物，产物吸光度与样本中NGAL浓度正相关，终止反应后检测吸光度，结合标准曲线即可准确测定大鼠样本中NGAL的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.5ng/mL

检测范围：1ng/mL - 150ng/mL

反应时间：总反应120分钟（孵育60min、酶结合30min、显色30min）

保存条件：2-8℃密封避光保存，原装试剂未开封可长期稳定存放

有效期：12个月

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数拟合标准曲线，相关系数R²≥0.991

注意事项：尿液、血清样本均可检测，浑浊样本需离心过滤后使用
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

1. 试剂室温复温 30min，配制洗涤工作液，尿液 / 血清样本低速离心去除沉淀，取出酶标板分设孔位。

2. 梯度标准品 50μL 加入标准孔，待测样本 50μL 加入样品孔，空白孔添加稀释缓冲液。

3. 全部孔位加入酶标记工作液 100μL，封板膜密封，37℃孵育 68min。

4. 洗板 5 次，每次加满洗涤液静置 30s，倒扣甩干，彻底去除未结合反应物。

5. 避光添加显色液 A、B 各 50μL，轻微震荡，37℃避光显色 15min。

6. 滴加终止液 50μL / 孔，混匀终止显色。

7. 酶标仪 450nm 检测吸光度，对照标准曲线算出 NGAL 浓度。