大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA试剂盒

本试剂盒运用经典双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，酶标板微孔预先包被大鼠Lp-PL-A2特异性捕获抗体。孵育过程中，样本、标准品中的大鼠Lp-PL-A2抗原与固相捕获抗体特异性结合，洗涤去除未结合组分后，加入HRP标记的检测抗体与之结合，构建固相抗体-抗原-酶标抗体的免疫复合物体系。随后加入TMB底物发生酶促显色反应，显色强度与样本中Lp-PL-A2浓度呈正向关联，终止反应后通过酶标仪测定吸光度，对照标准曲线即可准确测定大鼠样本中脂蛋白磷脂酶A2的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.1ng/mL

检测范围：0.2ng/mL - 50ng/mL

反应时间：总反应120分钟（孵育60min、酶反应30min、显色30min）

保存条件：2-8℃冷藏，抗体、酶结合物组分需单独密封避光保存

有效期：12个月

检测波长：450nm/630nm双波长检测

标准曲线绘制：标准品梯度稀释，四参数Logistic回归拟合，曲线相关系数R²≥0.990

注意事项：试剂使用前需平衡至室温，孵育温度严格控制在37℃，避免温度偏差影响酶活性
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

1. 试剂室温放置 30min 化开结晶洗涤液，离心分装待测样本去除沉淀杂质，裁剪对应数量酶标条，其余密封冷藏。

2. 标准品孔梯度加样 50μL 标准品，检测孔加入 50μL 处理后待测样本，空白对照孔补加样本稀释液 50μL。

3. 每孔加入酶标记物混合液 100μL，封板封口，水平晃动酶标板 10 秒，37℃水浴孵育 55min。

4. 弃液洗板，每孔灌满洗涤液静置 35s，甩干，连续洗板 6 次，吸水纸彻底拍干微孔。

5. 避光条件下每孔加入显色 A、B 液各 50μL，37℃避光孵育显色 18min。

6. 精准每孔滴加 50μL 终止液，充分震荡混匀终止酶促显色。

7. 450nm 波长测定 OD 值，依托标准曲线计算样本 Lp-PL-A2 浓度。