大鼠正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将纯化的大鼠RANTES/CCL5特异性抗体包被于酶标板微孔内，形成固相抗体。检测时，样本、标准品中的大鼠RANTES/CCL5抗原会与固相抗体特异性结合，充分洗涤去除未结合物质后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”的免疫复合物。再次洗涤洗除游离酶标抗体后，加入底物TMB进行显色反应，在HRP催化下TMB转化为蓝色产物，终止液作用后转为黄色，最终通过酶标仪测定450nm波长处的吸光度值.
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤1.0pg/mL

检测范围：2.5pg/mL - 80pg/mL

反应时间：总反应时长120分钟（包被结合60min、酶促反应30min、显色反应30min）

保存条件：试剂盒未开封2-8℃冷藏保存，严禁冷冻；开封后试剂密封2-8℃存放

有效期：未开封原装试剂盒12个月

检测波长：450nm（主波长），630nm（参比波长）

标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，采用四参数Logistic拟合绘制标准曲线，拟合度R²≥0.990

注意事项：实验样本需避免反复冻融，显色过程避光操作，洗板需彻底，防止非特异性吸附影响检测结果
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发

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实验操作流程：

1. 提前将试剂盒所有试剂、待测血清 / 组织上清样本室温平衡 30min，配制 1× 洗涤缓冲液，取出酶标板预留所需孔位，剩余板条密封 4℃避光保存。

2. 设置空白孔、标准品梯度孔、待测样本孔，每孔先加入 50μL 对应浓度标准品或待测样本，空白孔加入等量样本稀释液。

3. 每孔立即加入 50μL 酶结合工作液，轻轻震荡酶标板 15s 混匀，封板膜密封板条，37℃恒温孵育 60min。

4. 揭去封板膜，弃去孔内全部液体，每孔加满洗涤液静置 30s 后甩干，重复洗板 5 次，最后一次拍干孔内残留液体。

5. 每孔依次加入显色底物 A 液、B 液各 50μL，避光轻柔震荡混匀，37℃避光显色 15min。

6. 显色完毕每孔快速加入 50μL 终止液终止反应，轻晃酶标板充分混匀。

7. 酶标仪设定 450nm 波长，15min 内读取各孔 OD 值，根据标准品曲线计算样本 RANTES/CCL5 实际浓度。