人5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA试剂盒

本试剂盒采用经典双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板预先固定纯化的人5脂加氧酶捕获抗体，加入标准品与待测样本后，样本中的5-LO抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗涤去除未结合杂质，再加入酶标记的5-LO检测抗体，形成特异性免疫夹心复合物，经充分洗涤去除多余酶标抗体，加入底物显色液进行酶促显色，产物颜色深浅与样本中5-LO蛋白含量呈正相关，终止反应后检测吸光度，对照标准曲线即可完成5脂加氧酶的定量检测。
基本参数‌：

产品名称：人5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA试剂盒

英文名称：5-LO/LOX Elisa Kit
货号：Y-E3028

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测值0.06ng/mL，适配炎症通路关键酶低丰度检测

检测范围：0.1ng/mL - 45ng/mL，覆盖炎症正常及激活表达区间

反应时间：完整实验反应时长95分钟，操作简便高效

保存条件：2-8℃避光冷藏保存，抗体试剂严禁高温，洗涤液常温保存

有效期：未开封有效期7个月，开封后1个月内用完

特异性：特异性识别人5脂加氧酶，与其他脂加氧酶亚型无交叉结合反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤11%，满足科研实验误差标准

注意事项：组织、细胞样本需充分裂解，去除杂质；洗板步骤需彻底，避免非特异性吸附，实验试剂禁止跨批次混用
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

样本处理：细胞裂解液上清离心去除杂质，原液可直接检测；标准品溶解后梯度稀释制备标准曲线液。

加样上板：空白孔加入基础稀释液 50μL，标准品孔、样本孔各加对应液体 50μL。

一步添加酶标检测液：所有孔加入酶标记特异性抗体 100μL，封板密封。

孵育反应：37℃避光孵育 75min。

洗板操作：弃去孔内液体，洗涤液加满浸泡 40s，洗板 6 次，吸干水分。

显色步骤：显色 A、B 液各 50μL 每孔，避光显色 19min。

终止读数：加终止液 50μL，450nm 测定 OD 值，计算样本 5-LO 含量。
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