人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA试剂盒

本试剂盒采用酶联免疫吸附夹心法原理，预先将纯化的人2,3-二磷酸甘油酸特异性抗体包被于微孔板孔底，形成固相抗体；向孔内加入标准品、待测样本，样本中的2,3-DPG与固相抗体特异性结合，洗去未结合杂质后，加入酶标记检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，经彻底洗涤去除未结合酶标抗体，加入酶底物显色液进行显色反应，底物在结合酶的催化下产生有色产物，产物颜色深浅与样本中2,3-DPG的含量呈正相关，最后通过酶标仪测定特定波长下的吸光度值，结合标准曲线即可精准计算出样本中2,3-DPG的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA试剂盒

英文名称：2, 3-DPG ELISA Kit
货号：Y-E2628

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度可达0.1μmol/L，可精准识别微量样本含量，无交叉检测干扰

检测范围：0.2μmol/L - 8μmol/L，覆盖人体正常生理及病理异常表达区间

反应时间：全程操作反应时长90分钟，包含温育、洗板、显色、终止完整流程

保存条件：试剂盒未开封2-8℃冷藏保存，严禁冷冻；开封后试剂密封避光2-8℃存放

有效期：未开封原装试剂盒有效期6个月，开封后建议1个月内使用完毕

特异性：仅特异性识别人体2,3-二磷酸甘油酸，与人体同类磷酸甘油酸衍生物无交叉反应

重复性：板内变异系数CV≤8%，板间变异系数CV≤10%，检测数据稳定性良好

注意事项：样本需新鲜采集、低温离心处理，避免溶血；温育过程严格把控温度与时长，显色后需在15分钟内完成读数，试剂禁止混用不同批次产品
关键注意事项：

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书，不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异

所有试剂需按要求储存，未用完的试剂需密封后放回规定温度（通常2-8℃或-20℃）

避免试剂污染，不同组分的移液器枪头需分开使用

洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖，防止出现假阳性结果

显色过程需避光，避免阳光直射影响结果
实验步骤如下：

样本预处理：血清 / 血浆样本室温融化，3000r/min 离心 10min 去除杂质沉淀，用试剂盒配套样本稀释液按 1:5 比例稀释待测样本，混匀备用；标准品粉剂加入标准品稀释液充分涡旋溶解，梯度倍比稀释配制 5 组浓度梯度标准液。

加样设孔：设置空白孔、标准品孔、待测样本孔，空白孔仅加样本稀释液 50μL；标准品孔每孔加入对应浓度标准液 50μL；样本孔加入稀释后待测样本 50μL，全程避免孔内产生气泡。

一步法酶结合物添加：所有孔直接加入酶标记抗体工作液 100μL，封板膜密封酶标板，轻轻震荡板面使液体混匀。

温育孵育：将封好的酶标板置于 37℃恒温孵育箱避光温育 60min，孵育过程中禁止随意挪动酶标板。

洗板操作：撕掉封板膜，弃去孔内液体，每孔加满浓缩洗涤液稀释后的洗涤工作液，浸泡 30s 后甩干，重复洗板 5 次，最后一次拍干孔内残留水分。

底物显色：每孔依次加入显色液 A 液 50μL、显色液 B 液 50μL，轻柔混匀，37℃避光显色 15min，观察标准品孔出现清晰蓝色梯度即可终止反应。

终止读数：每孔快速加入终止液 50μL 终止显色，液体由蓝变黄，15min 内使用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔 OD 值，根据标准曲线计算样本中 2,3-DPG 含量。
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