大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔包被大鼠apo-A1特异性捕获抗体，加入标准品与大鼠待测样本后，样本中的载脂蛋白A1与固相抗体特异性免疫结合，洗涤去除游离杂蛋白，加入酶标记apo-A1检测抗体孵育结合，形成免疫复合物，底物显色后显色深浅对应样本中apo-A1含量，通过吸光度检测及标准曲线拟合实现定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.2mg/L

检测范围：0.5mg/L - 120mg/L

反应时间：全程120分钟（样本孵育60min，酶标孵育30min，显色30min）

保存条件：2-8℃避光保存，洗涤液室温存放

有效期：未开封储存有效期12个月

特异性：特异性检测大鼠apo-A1，与apo-B、apo-E等其他载脂蛋白无交叉反应

重复性：板内变异系数CV≤4%，板间变异系数CV≤6%

注意事项：血清样本避免高脂浑浊；样本稀释比例精准；洗涤充分，消除非特异性吸附
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒常温静置 30min，配制洗涤缓冲液，梯度稀释 apo-A1 标准品，标记酶标板各类微孔。

标准孔加入梯度载脂蛋白 A1 标准品 50μL，待测孔加入 50μL 大鼠血清稀释液，空白孔无添加。

全部检测孔加入一步法酶标记抗体工作液 100μL，覆膜封口，37℃恒温孵育 60min。

揭膜弃液，洗涤液加满每孔浸泡 35s 甩干，循环洗板 5 次，拍净残留洗涤液。

每孔加显色 A 液、B 液各 50μL，避光 37℃显色 15min。

加入终止液 50μL 终止反应，轻晃板面混匀液体。

酶标仪 450nm 测定 OD 值，计算 apo-A1 含量。