大鼠游离三碘甲状腺原氨酸(Free-T3)ELISA试剂盒

本试剂盒运用竞争法ELISA检测原理，酶标板固相包被Free-T3特异性抗原，实验体系中大鼠样本内的游离三碘甲状腺原氨酸可与固相抗原竞争结合定量的酶标记特异性抗体，样本中Free-T3浓度越高，固相结合的酶标抗体越少，显色反应后吸光度值越低，通过标准曲线回归计算，可准确测定样本中Free-T3的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.15pmol/L

检测范围：0.4pmol/L - 25pmol/L

反应时间：全程140分钟（样本孵育80min，酶标孵育30min，显色30min）

保存条件：2-8℃冷藏避光，禁止冷冻任何组分试剂

有效期：未开封储存有效期12个月

特异性：专一检测大鼠游离T3，与总T3、游离T4、甲状腺球蛋白无交叉反应

重复性：板内变异系数CV≤5%，板间变异系数CV≤6%

注意事项：样本采集后低温快速离心；试剂平衡至室温后再操作；读数前检查板孔无气泡、无污渍
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒常温回温 28min，稀释洗涤工作液，逐级配制 Free-T3 标准梯度液，标记酶标板孔位。

标准孔加入梯度游离三碘甲状腺原氨酸标准品 50μL，待测孔加入 50μL 大鼠血清样本，空白孔空置。

检测孔加入一步法酶结合抗原工作液 100μL，封板膜密封，37℃孵育 50min。

弃液后洗涤液浸润微孔 35s 甩干，重复洗板 5 次，吸水纸拍净残留。

每孔添加显色 A 液、B 液各 50μL，避光 37℃显色 14min。

逐孔滴加终止液 50μL 终止显色，震荡混匀。

酶标仪 450nm 读取数值，计算样本 Free-T3 浓度。