大鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔固定抗大鼠FⅫ特异性抗体，加入待测大鼠样本和梯度标准品，样本中的FⅫ抗原与固相抗体特异性结合，洗涤后加入酶标检测抗体形成夹心结构，显色终止后检测吸光度，结合标准曲线定量测定FⅫ含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)ELISA试剂盒

英文名称：FⅫ ELISA Kit
货号：Y-E1104

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度≤0.09ng/mL，可精准检测大鼠血浆中凝血因子Ⅻ微量含量。

检测范围：0.1ng/mL - 21ng/mL，适配大鼠内源性凝血启动相关样本检测。

反应时间：总实验时长95分钟，样本孵育30min、酶孵育30min、显色20min、终止15min。

保存条件：2-8℃避光冷藏保存，所有试剂密封存放，禁止冷冻。

有效期：原装试剂盒有效期6个月，恒温存放无活性损失。

显色系统：稳定TMB显色体系，显色均匀，无假性显色干扰结果。

检测波长：450nm检测波长，600nm校正波长，提升检测准确性。

标准曲线绘制：四参数拟合标准曲线，R²≥0.991，定量精准可靠。

特异性：特异性识别大鼠凝血因子Ⅻ，与其他凝血因子无交叉反应。

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%，实验重复性良好。

注意事项：避免样本剧烈震荡，防止因子蛋白结构破坏；严格遵循孵育时长要求。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

预包被板每孔加入标准品稀释液 53μL，大鼠血浆样本 53μL，标记分组与孔号。

加入 HRP 酶标记抗体 97μL，覆膜封板，37℃孵育 54min。

废液倾倒，洗涤液浸泡 25s，拍干，洗板 4 次。

避光滴加显色 AB 液各 50μL，轻微震动微孔板，显色 16min。

终止液 50μL 每孔滴加，终止显色并混匀液体。

清洁板底污渍后酶标仪 450nm 检测吸光度。

拟合标准曲线计算 FⅫ 含量，评估内源性凝血通路启动因子。
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