大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，固相酶标板包被大鼠Cav-1特异性抗体，可特异性识别并结合样本中的窖蛋白Caveolin1抗原。经样本孵育、洗板除杂、酶标抗体结合后，加入底物发生显色反应，显色强度与样本中Cav-1蛋白含量呈线性正相关。通过酶标仪检测吸光度，结合标准曲线可精准定量大鼠样本中Cav-1的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度0.08ng/mL，可精准检测组织、细胞中低丰度Cav-1蛋白表达量。

检测范围：0.1ng/mL - 10ng/mL，适配大鼠血管组织、脂肪组织、细胞裂解液、血清样本。

反应时间：全流程105分钟，抗体孵育75分钟，底物显色20分钟，反应条件温和稳定。

保存条件：试剂盒全部组分2-8℃避光保存，洗涤液室温保存，避免低温结冰。

有效期：原装未拆封有效期6个月，开封后试剂密封保存，30天内用完。

显色系统：HRP标记抗体结合TMB底物显色，反应特异性强，显色结果稳定持久。

检测波长：450nm为主检测波长，630nm为校正波长，消除背景误差。

标准曲线绘制：梯度标准品检测取值，四参数拟合标准曲线，线性相关系数R²≥0.993。

特异性：特异性识别大鼠Cav-1，与Cav-2、Cav-3亚型无交叉反应，物种特异性专一。

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%，数据稳定性优异，适合批量样本检测。

注意事项：细胞裂解样本需充分离心去除沉淀；温育过程需密封避光，防止液体蒸发；显色终止后需10分钟内完成读数，避免数值衰减。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温放置 35min，配比洗涤液，梯度稀释 Cav-1 标准品，取出酶标板条。

标准孔加梯度标准品 50μL，细胞裂解样本孔加入稀释后待测液 50μL，空白孔添加稀释缓冲液。

全孔加入酶偶联工作液 100μL，密封酶标板，37℃孵育 72min。

洗板 5 次，浸泡 35s 每轮，甩干液体后吸水纸拍干板孔。

避光添加显色 A、B 底物各 50μL，37℃避光显色 20min。

加入终止液 50μL 终止酶促反应，震荡混匀。

酶标仪 450nm 检测，计算 Cav-1 浓度。