大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板预先包被大鼠eNOS-3特异性捕获抗体，待测大鼠样本中的eNOS-3抗原与固相抗体特异性结合，洗板去除杂质后加入酶标检测抗体，形成稳定夹心复合物，底物显色后检测吸光度，依据标准曲线定量检测eNOS-3浓度。
基本参数‌：

产品名称：大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒

英文名称：eNOS-3 ELISA Kit
货号：Y-E1266

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度≤0.07ng/mL

检测范围：0.2ng/mL - 8ng/mL

反应时间：总反应时长125min

保存条件：2-8℃避光保存，试剂密封防潮，严禁冷冻

有效期：未开封有效期6个月

显色系统：高稳定性酶促TMB显色体系

检测波长：450nm、620nm双波长校正

标准曲线绘制：梯度标准品OD值拟合四参数标准曲线，精准定量

特异性：特异性识别大鼠eNOS-3亚型，与其他NOS亚型无交叉反应

重复性：板内CV＜7.5%，板间CV＜9.5%

注意事项：样本全程低温操作，保护酶结构与活性；避免反复冻融；显色、读数步骤严格标准化
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

微孔板每孔加入标准品稀释液 55μL，待测内皮细胞上清样本 55μL，设立对照孔。

全孔加入酶标工作液 95μL，封板密封，37℃孵育 66min。

废液全部弃除，洗涤液浸泡 34s，拍干，连续洗板 4 次。

避光加入显色 A、B 液各 50μL，轻震板体，显色 17min。

加入终止液 50μL 终止酶促显色，充分混匀孔内液体。

酶标仪 450nm 测定吸光度并记录数据。

标准曲线计算 eNOS-3 表达量，对比亚型蛋白差异。
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