大鼠甲基化酶(Methylase)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，固相载体包被抗大鼠甲基化酶特异性抗体，能够特异性识别并结合待测样本中的甲基化酶抗原。孵育完成特异性结合后，洗涤去除未结合杂质，加入HRP标记的甲基化酶检测抗体，形成稳定的免疫夹心复合物。底物显色强度与样本中甲基化酶含量成正比，通过酶标仪检测吸光度并拟合标准曲线，可定量检测大鼠样本中甲基化酶的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.12U/L

检测范围：0.24U/L - 22U/L

反应时间：总反应时长135min（孵育105min、显色30min）

保存条件：2-8℃干燥冷藏，试剂密封保存，避免水汽污染

有效期：12个月（未开封）

显色系统：稳定型TMB显色体系，适配酶类检测

检测波长：450nm，620nm校正

标准曲线绘制：6点梯度酶标准品检测，四参数拟合标准曲线

特异性：特异性结合大鼠甲基化酶，无其他修饰酶类交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：实验环境需洁净无核酸酶污染，避免影响酶学检测结果
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温静置 30min，稀释洗涤液，梯度稀释甲基化酶标准品，拆分酶标板条。

空白孔加稀释液，标准孔加梯度标准品 50μL，样本孔上样待测液 50μL。

每孔加入酶标记抗体 100μL，封板 37℃孵育 63min。

洗板 5 次，浸泡 30s 每回，甩干液体拍干板孔。

避光添加显色 A、B 液各 50μL，37℃避光显色 17min。

加入终止液 50μL 终止酶促反应。

450nm 读取吸光度，标准曲线换算甲基化酶含量。