大鼠己糖激酶(HK)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫检测原理，酶标板微孔包被大鼠己糖激酶（HK）特异性抗体，可特异性捕获样本中的HK蛋白抗原。通过样本孵育、特异性结合、洗板除杂、酶标抗体结合等步骤后，加入TMB底物进行显色反应，辣根过氧化物酶催化底物显色，终止反应后检测吸光度。样本吸光度数值与HK浓度呈正相关，对照标准曲线即可精准定量大鼠样本中己糖激酶的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.15U/L

检测范围：0.3U/L - 25U/L

反应时间：总反应时长140min（酶特异性孵育110min、显色30min）

保存条件：2-8℃避光保存，酶类试剂禁止剧烈震荡，防止酶失活

有效期：未开封12个月

显色系统：适配酶活检测的优化TMB显色系统

检测波长：450nm

标准曲线绘制：酶标准品梯度稀释，检测OD值，四参数拟合定量曲线

特异性：特异性识别大鼠己糖激酶，与其他糖代谢激酶无交叉反应

重复性：板内CV≤9%，板间CV≤11%

注意事项：样本需低温采集、快速处理，避免己糖激酶活性降解
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂常温放置 34min，配制洗涤工作液，稀释 HK 冻干标准品，取用酶标板所需条带。

标准孔梯度加标品 50μL，样本孔加入稀释后组织 / 细胞裂解样本 50μL，空白孔补稀释液。

每孔添加酶偶联试剂 100μL，封板膜密封，37℃孵育 70min。

洗板 5 次，洗液浸泡 34s 每次，弃液后充分拍干微孔。

避光加显色 A、B 液各 50μL，37℃避光显色 18min。

滴入终止液 50μL 混匀终止显色。

450nm 检测 OD 值，计算样本己糖激酶 HK 浓度。