大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶免疫分析法核心原理，酶标板微孔包被大鼠pERK特异性捕获抗体，待测样本与标准品中的pERK抗原可特异性吸附于固相抗体上，充分结合后洗除未结合物质，加入对应的酶标检测抗体形成免疫夹心复合物，利用酶催化底物产生有色产物，颜色深浅与样本中pERK含量成正比，通过酶标仪检测吸光度，对照标准曲线即可定量测定大鼠样本中pERK的浓度水平。
基本参数‌：

产品名称：大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒

英文名称：pERK ELISA Kit
货号：Y-E1143

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度≤0.08ng/mL

检测范围：0.2ng/mL - 6ng/mL

反应时间：总反应时长130min，37℃恒温温育

保存条件：2-8℃避光密封保存，底物液需单独避光存放，禁止冷冻

有效期：未开封有效期6个月

显色系统：高灵敏度TMB显色体系，显色均匀稳定

检测波长：450nm（检测）、620nm（参比）

标准曲线绘制：设置6个梯度标准浓度，测值后拟合标准曲线，回归系数R²≥0.995

特异性：特异性结合大鼠pERK1/2，与总ERK、其他磷酸化激酶无交叉反应

重复性：板内CV＜8%，板间CV＜10%

注意事项：样本提取需加入磷酸酶抑制剂，防止蛋白去磷酸化；温育过程避免孔板晃动，保证反应均匀；终止后15min内完成读数
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
实验步骤如下：

微孔板分孔标记，标准品做 6 倍梯度稀释后每孔加 55μL，待测组织裂解液样本每孔上样 55μL。

无需洗板直接加入辣根过氧化物酶标记抗体工作液 95μL，封板后 37℃孵育 70min。

配置 1× 洗涤液，每孔加满洗涤液浸泡 25s，弃液拍干，连续洗板 5 次。

避光环境下每孔先后加入显色液 A、B 各 50μL，轻微震荡，37℃避光显色 15min。

每孔加入终止液 50μL，终止催化显色反应，充分混匀微孔板内液体。

去除板底指纹与水渍，酶标仪 450nm 测定 OD 值，空白孔数值用于基线扣减。

拟合标准曲线计算样本 pERK 浓度，高浓度样本用稀释液稀释后重新检测校正结果。
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