大鼠活化蛋白C(APC)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附原理，固相包被大鼠APC特异性抗体，待测大鼠样本中的活化蛋白C抗原与抗体特异性结合，形成稳定免疫复合物，经酶促显色、终止反应后检测吸光度，依据标准曲线定量大鼠APC含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.1μg/mL

检测范围：0.2μg/mL～15μg/mL

反应时间：总时长100min，孵育70min，显色15min，读数5min

保存条件：2～8℃密封避光保存，凝血类蛋白试剂严禁冷冻

有效期：原装6个月，开封后2周内使用

显色系统：稳定型TMB显色体系，适配凝血蛋白检测

检测波长：450nm，620nm参比校准

标准曲线绘制：四参数曲线拟合，R²≥0.990

特异性：特异性结合大鼠活化蛋白C，与蛋白S、凝血因子无交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：血浆样本需规范抗凝，无凝血、无溶血；实验全程避免外源蛋白酶干扰；试剂平衡至室温再使用。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温回温 27min，稀释 APC 冻干标准品建立梯度浓度，划分酶标板孔位类型。

一步直接加样 100μL 标准品与大鼠抗凝血浆样本入对应孔，空白孔加入稀释液。

密封酶标板，37℃恒温孵育 66min，捕获血浆内活化蛋白 C。

弃液后洗涤液加满每孔静置 27s，洗板 4 次，倒扣拍干余液。

除去空白孔，加入 HRP 酶联抗体 100μL，避光封板孵育 24min。

加入显色底物液 100μL，避光摇匀，显色 12min。

终止液终止酶促反应，450nm 测 OD 值，对照标准曲线计算 APC 数值。