大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA试剂盒

本试剂盒采用高特异性双抗体夹心ELISA原理，酶标板微孔包被大鼠Tie-2特异性抗体，待测大鼠样本中的Tie-2抗原与固相抗体特异性结合，经酶标记二抗结合、底物显色后，检测吸光度值，结合标准曲线定量检测大鼠Tie-2蛋白的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤16pg/mL

检测范围：32pg/mL - 1100pg/mL

反应时间：总反应时长160分钟（样本温育100分钟、酶二抗温育30分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光保存，禁止冷冻，所有试剂密封存放

有效期：未开封有效期6个月，开封后1.5个月内使用

显色系统：HRP催化TMB显色体系

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数逻辑拟合，R²≥0.990

特异性：特异性结合大鼠Tie-2激酶，与其他酪氨酸激酶无交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：细胞、组织样本充分裂解；洗涤步骤充分，去除非特异性结合杂质
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒室温放置 36min，梯度稀释 Tie-2 标准品，对酶标板孔位进行分组标记。

一步法直接加样 100μL 梯度标准品与大鼠血管内皮细胞上清样本至对应孔，空白孔补稀释液。

密闭封板，37℃恒温孵育 87min，特异性结合膜受体 Tie-2 抗原。

倾倒废液，洗涤液浸泡每孔 43s，连续洗板 6 次，彻底清除游离杂蛋白。

检测孔加入 HRP 标记检测抗体 100μL，避光封板孵育 39min。

依次添加显色 A 液、B 液各 50μL，混匀避光显色 20min。

加入终止液终止反应，10min 内 450nm 酶标仪读数，计算 Tie-2 含量。