大鼠骨粘连蛋白(ON)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板包被纯化的大鼠ON特异性抗体，样本中的骨粘连蛋白抗原可与包被抗体特异性吸附，经酶标记抗体结合、底物显色后，测定各孔吸光度，依据标准曲线精准计算大鼠样本中ON的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.4ng/mL

检测范围：1ng/mL - 80ng/mL

反应时间：总反应时长110分钟（样本温育50分钟、酶温育30分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光保存，开封后密封防潮存放

有效期：未开封有效期12个月，开封后2个月内使用

显色系统：TMB底物显色体系，显色稳定均匀

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数拟合，R²≥0.994

特异性：特异性识别大鼠骨粘连蛋白，与其他骨基质蛋白无交叉反应

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%

注意事项：血清、组织上清样本均可检测；样本避免高脂、溶血，保证检测准确性
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒室温放置 35min，梯度稀释 ON 标准品，标记酶标板标准梯度孔、大鼠骨骼匀浆待测孔。

一步法直接加样，标准孔加梯度标准品 100μL，待测孔加稀释匀浆样本 100μL，空白孔添加稀释液。

覆膜封口，37℃恒温孵育 79min，完成抗原捕获结合。

倒掉孔内液体，洗涤液浸润每孔 37s，重复洗板 5 次，彻底洗去游离组分。

所有样品孔加入酶标记检测抗体 100μL，避光 37℃孵育 35min。

分加显色 A 液、B 液各 50μL，轻微振荡后避光显色 18min。

加入终止液终止酶促反应，酶标仪 450nm 读取吸光度，计算 ON 表达量。