大鼠骨碱性磷酸酶(BALP)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附原理，固相包被大鼠BALP特异性抗体，待测大鼠样本中的骨碱性磷酸酶抗原与抗体特异性结合，通过酶标记抗体放大信号，底物显色后测定吸光度，依据标准曲线回归公式，定量检测样本中BALP的活性及含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.3U/L

检测范围：1U/L - 100U/L

反应时间：总反应时长100分钟（样本温育40分钟、酶反应30分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光冷藏，显色液避光单独存放

有效期：未开封有效期8个月，开封后1.5个月内用完

显色系统：酶促特异性底物显色体系

检测波长：405nm

标准曲线绘制：线性拟合标准曲线，R²≥0.993

特异性：专一检测大鼠骨碱性磷酸酶，与肝、肠源性碱性磷酸酶无交叉反应

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：样本避免高温、剧烈震荡；检测全程避光，防止底物降解
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂室温回温 33min，梯度稀释 BALP 标准品，划分酶标板空白对照、标准梯度、大鼠骨上清样本孔。

一步法直接加样 100μL 标准液与稀释待测样本入对应孔，空白孔补稀释缓冲液。

封板封口，37℃恒温孵育 76min，特异性捕获样本内 BALP 抗原。

倒掉孔内液体，洗涤液浸泡每孔 35s，重复洗板 5 次，充分洗脱未结合杂质。

所有检测孔加入酶联抗体工作液 100μL，避光封板，37℃孵育 30min。

分加显色 A、B 液各 50μL，混匀后避光 37℃显色 16min。

加入终止液终止反应，酶标仪 450nm 读取 OD 值，计算 BALP 浓度。