大鼠抗IVIgG抗体ELISA试剂盒

本试剂盒基于间接ELISA检测原理，将纯化的大鼠IVIgG抗原固定于酶标板孔底，待测样本中的抗IVIgG抗体可与固相抗原发生特异性免疫结合，洗去未结合杂质后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的特异性二抗进行孵育结合，再次洗涤后加入显色底物发生酶促显色反应，终止显色后检测吸光度，样本吸光度数值与抗IVIgG抗体含量成正比，结合标准曲线可精准定量样本中目标抗体水平。
基本参数‌：

产品名称：大鼠抗IVIgG抗体ELISA试剂盒

英文名称：Rat anti-IVIgG antibody ELISA Kit
货号：Y-E1337

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度≤0.05ng/mL

检测范围：0.1ng/mL - 10ng/mL

反应时间：样本孵育60分钟，二抗孵育30分钟，显色15分钟，总反应105分钟

保存条件：所有试剂组分2-8℃避光冷藏，浓缩洗涤液可室温短期存放，剩余试剂严禁冻存

有效期：原装未拆封有效期12个月

显色系统：优化型TMB单组分显色液，避光显色，硫酸终止液终止

检测波长：450nm单一波长检测

标准曲线绘制：采用六梯度标准品浓度，四参数Logistic拟合绘制标准曲线，计算样本浓度

特异性：特异性识别大鼠IVIgG抗体，与大鼠IgM、IgA抗体无明显交叉反应

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：洗涤步骤需充分，避免非特异性结合；标准品需现配现用，稀释后不可留存；终止后15分钟内完成上机检测
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒拆封后置于室温环境回温，按说明书比例稀释浓缩洗涤缓冲液备用。

酶标板孔位分区标记，空白孔不加样本，其余孔添加梯度标准品、对照品与稀释待测样本，同步加入酶标记物。

覆膜封板，放入 37℃温育箱避光孵育 1 小时。

手动倒扣弃液，每孔加满洗涤液静置 25s 后甩掉，重复洗板 5 遍，滤纸彻底拍干微孔。

每孔等量加入显色底物液，避光条件下 37℃反应 12min。

快速加入终止液终止底物催化反应，水平摇晃酶标板 10s 混匀。

使用酶标仪在 450nm 处测定吸光度，依据标准品拟合曲线换算样本含量。
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