大鼠睾酮(T)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争性酶联免疫吸附法，针对大鼠睾酮建立高特异性检测体系，酶标板包被睾酮抗原，样本中的内源性睾酮与固相抗原竞争结合特异性抗体，结合的酶标抗体量与样本睾酮含量负相关，底物显色后检测吸光度，对照标准曲线可精准测定大鼠样本中睾酮的含量水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.1ng/dL

检测范围：0.3ng/dL - 100ng/dL

反应时间：总反应时长120分钟（抗原抗体结合60分钟、酶反应30分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光密封保存，标准品冻存于-20℃，避免反复冻融

有效期：未开封有效期12个月，开封后组分2-8℃可保存1个月

显色系统：TMB显色体系，HRP酶促反应显色

检测波长：450nm

标准曲线绘制：四参数逻辑回归拟合，标准曲线拟合度R²≥0.995

特异性：特异性识别大鼠睾酮，与雌二醇、孕酮等性激素交叉反应率＜2%

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%

注意事项：血清样本避免高脂、溶血；检测前所有试剂恢复至室温（20-25℃）；严格把控温育温度与时间
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温回温 32min，用稀释液溶解睾酮标准品并做倍比梯度稀释，区分酶标板孔位组别。

一步直接加样：标准孔加梯度睾酮标准液 100μL，待测孔加大鼠血清样本 100μL，空白孔加稀释缓冲液。

覆膜密封酶标板，37℃恒温孵育 75min，保证睾酮抗原与包被抗体充分结合。

弃净孔中液体，洗涤液浸泡每孔 32s 后甩出废液，连续洗板 5 次，吸水纸拍干。

所有样品孔加入 HRP 酶标记抗体工作液 100μL，避光封板，37℃孵育 32min。

加入显色底物 AB 混合液 100μL，震荡混匀，37℃避光显色 17min。

加入终止液终止酶促反应，酶标仪 450nm 读取吸光值，换算大鼠样本睾酮浓度。