大鼠高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒

本试剂盒采用酶联免疫吸附双抗体夹心原理，预先将纯化的大鼠HDL特异性抗体包被于酶标板微孔内，标准品、待测大鼠样本中的HDL可与包被抗体特异性结合，再加入酶标记二抗形成抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物，经底物显色液催化显色，终止反应后通过酶标仪测定各孔吸光度值，吸光度数值与样本中HDL含量呈正相关，依据标准曲线即可精准计算样本中HDL的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.1mmol/L

检测范围：0.2mmol/L - 8.0mmol/L

反应时间：总反应时长90分钟（温育60分钟、洗涤后显色30分钟）

保存条件：试剂盒未开封2-8℃冷藏保存，严禁冷冻；开封后组分密封2-8℃存放

有效期：未开封有效期6个月，开封后建议1个月内用完

显色系统：TMB单组分显色液，过氧化物酶催化显色体系

检测波长：450nm（主波长），630nm（参比波长）

标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制四参数拟合标准曲线，相关系数R²≥0.990

特异性：特异性识别大鼠HDL，与大鼠低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白无交叉反应

重复性：板内变异系数CV≤8%，板间变异系数CV≤10%

注意事项：样本需新鲜分离血清，避免溶血、脂血；温育过程需避光，严格控制温度37℃；显色终止后15分钟内完成上机检测
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。

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实验操作流程：

提前取出试剂盒所有组分室温平衡 30min，配制 HDL 标准品梯度稀释液，设置空白孔、标准品孔、待测样本孔并做好标记。

每孔直接加入对应稀释完毕的标准品、大鼠血清样本各 100μL，空白孔加入等量样本稀释液，全程避免孔壁挂液。

封板膜密封酶标板，37℃恒温孵育 60min，期间禁止晃动酶标板，防止抗原抗体结合体系扰动。

弃去板内全部液体，每孔加满试剂盒配套洗涤液浸泡 30s 后甩干，重复洗板 5 次，最后一次拍干孔内残留液体。

除空白孔外所有孔加入 HRP 标记 HDL 特异性检测抗体工作液 100μL，再次封板 37℃避光孵育 30min。

每孔依次加入显色底物 A 液、B 液各 50μL，轻柔震荡混匀，37℃避光显色 15min，肉眼可见标准品孔梯度蓝色差异即可终止。

每孔快速加入终止液 50μL 终止显色反应，15min 内使用酶标仪在 450nm 波长测定各孔 OD 值，对照标准曲线计算样本 HDL 浓度。