大鼠Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)ELISA试剂盒

双抗体夹心酶联免疫吸附原理，微孔板预包被抗大鼠 Col Ⅱ 捕获抗体，样本软骨特异性 Ⅱ 型胶原结合固相抗体，加入 HRP 标记检测抗体形成夹心复合物，洗涤显色后依据标准曲线定量 Col Ⅱ 浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.3ng/mL，适配关节软骨组织胶原检测

检测范围：0.6ng/mL - 60ng/mL

反应时间：总时长90分钟，样本孵育60分钟，二抗孵育30分钟

保存条件：2-8℃避光冷藏，胶原抗体组分密封保存

有效期：原装未拆封6个月有效

显色系统：适配蛋白检测的稳定TMB显色体系

检测波长：450nm检测，620nm参比校正

标准曲线绘制：6浓度梯度，四参数拟合，R²≥0.995

特异性：特异性结合大鼠Ⅱ型胶原，与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原无交叉反应

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%

注意事项：软骨组织样本充分裂解匀浆；避免蛋白高温变性；洗涤彻底，去除杂质干扰
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒室温静置 27min，洗涤液稀释 20 倍，关节软骨匀浆样本混匀。

标准品稀释：ColⅡ 标准品复溶梯度稀释 6 梯度，设立空白对照孔。

加样孵育：各孔 50μL 标准品、样本，酶结合物 50μL，37℃避光孵育 62min。

洗板操作：洗涤液浸泡 33s，拍干残液，洗板 5 次。

底物显色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 16min。

终止读数：终止液混匀，9min 内读取 450nm 吸光值。

数据计算：标准曲线定量软骨 Ⅱ 型胶原表达量。