大鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA试剂盒

双抗体夹心 ELISA，酶标板包被抗大鼠 Col Ⅰ 捕获抗体，样本中 Ⅰ 型胶原特异性结合固相抗体，再加入酶标记检测抗体形成夹心复合物，洗涤后底物显色，吸光度与样本胶原浓度正相关，标准曲线定量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限0.3ng/mL，适配组织、血清胶原含量检测

检测范围：0.6ng/mL - 60ng/mL

反应时间：总时长90分钟，样本孵育60分钟，二抗孵育30分钟

保存条件：2-8℃避光保存，胶原抗体组分禁止冷冻

有效期：原装未拆封6个月有效期

显色系统：稳定型TMB显色体系，适配结构蛋白检测

检测波长：450nm主波长检测

标准曲线绘制：6梯度标准品，四参数拟合，R²≥0.995

特异性：特异性识别大鼠Ⅰ型胶原，与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型胶原无交叉反应

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%

注意事项：组织样本充分匀浆裂解，去除纤维杂质；样本避免高温变性；洗涤充分，去除非特异性吸附蛋白
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒室温静置 25min，浓缩洗涤液 1:20 稀释，组织匀浆蛋白上清备用。

标准品稀释：ColⅠ 标准品复溶梯度稀释 6 个浓度，设立空白对照孔。

加样孵育：50μL 标准品 / 样本 + 50μL HRP 酶抗体，封膜 37℃避光孵育 60min。

洗板操作：洗涤液浸泡 30s，拍干残液，洗板 5 次。

底物显色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 15min。

终止读数：终止液混匀，10min 内检测 450nm OD。

数据计算：标准曲线定量组织 Ⅰ 型胶原总蛋白含量。