大鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒

双抗体夹心免疫酶联原理，固相载体包被抗大鼠 5-NT 捕获抗体，样本中 5 核苷酸酶结合至板底，加入 HRP 标记二抗结合靶蛋白另一抗原位点，洗涤去除游离酶标抗体，TMB 底物显色，OD 值与样本 5-NT 含量成正比，标准曲线定量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测值0.2U/L，精准检测血清、组织中酶活性指标

检测范围：0.4U/L - 40U/L

反应时间：总时长85分钟，样本孵育55分钟，酶标抗体孵育30分钟

保存条件：2-8℃避光保存，洗涤液室温密封存放，避免污染

有效期：未开封有效期6个月

显色系统：TMB优化显色体系，适配酶类指标检测，显色稳定

检测波长：450nm主波长检测

标准曲线绘制：6梯度标准品，四参数拟合，R²≥0.994

特异性：特异性识别大鼠5核苷酸酶，与其他核苷酸水解酶无交叉反应

重复性：板内CV≤5.5%，板间CV≤7%

注意事项：样本需新鲜制备，避免酶失活；避免脂血、溶血样本干扰；洗涤步骤充分，去除非特异性结合杂质
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂平衡：全套试剂室温放置 30min，洗涤液 20 倍稀释备用，血清样本充分混匀。

标准品稀释：5-NT 冻干标准品稀释配制 6 梯度标准液，空白孔仅加稀释液。

加样孵育：每孔 50μL 标准品 / 待测样本，酶标抗体 50μL，封膜 37℃避光孵育 60min。

洗板操作：洗涤液浸泡 30s，拍干，重复洗板 5 次。

底物显色：显色液 A、B 各 50μL，避光 37℃孵育 15min。

终止读数：终止液混匀，10min 内检测 450nm OD。

数据计算：曲线计算血清、组织上清 5 核苷酸酶活性对应蛋白含量。