一抗

产品基础信息

一抗核心标识：

宿主物种（兔源/鼠源/羊源等）、克隆类型（单抗/多抗）

亚型（如鼠单抗IgG1、兔多抗IgG）

免疫原信息：

免疫原类型（全长蛋白、重组蛋白片段、合成多肽等）

免疫原序列、修饰类型（如磷酸化Ser473位点）

技术参数：

浓度（如1mg/mL）、纯度（SDS-PAGE或HPLC验证，通常>90%）

特异性验证结果（如WB单一条带、IHC阳性定位）

交叉反应性（明确可检测的物种，如人/小鼠/大鼠）

产品性能与适用范围

验证实验类型：明确经过验证的应用场景，包括：

WB（蛋白质印迹）：推荐稀释比例（如1:1000-1:5000）、孵育条件

IHC/ICC（免疫组化/免疫细胞化学）：石蜡/冰冻切片适用类型、抗原修复方法

IP/Co-IP（免疫沉淀/免疫共沉淀）：推荐抗体用量、裂解液类型

ELISA/FCM（酶联免疫/流式细胞术）：特殊处理要求

局限性说明：

不适用于的实验类型或样本（如某些单抗仅识别天然构象蛋白，不适合WB）

潜在交叉反应物种或蛋白（如与同源蛋白的交叉结合率）

实验操作与使用指南

一、样本处理要求

样本类型适配：

总蛋白裂解液：推荐使用RIPA裂解液，添加蛋白酶/磷酸酶抑制剂

膜蛋白/核蛋白：需使用亚细胞组分分离试剂盒制备样本

组织样本：石蜡切片需进行脱蜡、抗原修复（柠檬酸盐缓冲液或EDTA缓冲液）

禁忌提示：避免使用含NaN3的样本（抑制酶标记物活性），避免反复冻融样本

二、标准操作流程

抗体准备：

平衡至室温后离心（12000rpm，2分钟）使溶液集中于管底

按照推荐比例稀释（如1μL抗体+999μL稀释液），现用现配

孵育条件：

室温孵育1-2小时或4℃过夜孵育（推荐4℃过夜，结合更充分）

孵育时需保持样本湿润，避免干燥导致非特异性结合

洗涤步骤：

WB：使用TBST洗涤3次，每次5分钟

IHC：使用PBS洗涤3-5次，每次3分钟，减少背景染色

二抗匹配建议：

种属匹配（如兔源一抗→羊抗兔二抗）

标记物选择（HRP标记用于WB/ELISA，荧光标记用于IF/FCM）

三、结果判读与分析

阳性结果特征：

WB：预期分子量位置出现清晰单一条带（注意蛋白修饰可能导致迁移偏移）

IHC：特定细胞/组织区域出现特异性染色（如细胞核/细胞质定位）

阴性结果排查：

确认样本中目标蛋白表达水平（可通过qPCR验证mRNA表达）

检查抗体稀释比例、孵育时间是否符合要求

验证二抗活性与标记物有效性

质量控制与储存说明

一、质控标准

批次一致性验证：每批产品需进行：

SDS-PAGE纯度检测（杂带<5%）

WB特异性验证（无交叉反应杂带）

梯度稀释线性验证（信号强度与抗体浓度正相关）

稳定性测试：

加速稳定性：37℃放置7天，活性保持率>90%

长期稳定性：-20℃保存12个月，活性无显著下降

二、储存与运输

短期储存：2-8℃可保存1个月（避免反复冻融）

长期储存：-20℃分装保存，保质期通常为12-24个月

运输条件：冰袋冷藏运输，避免温度波动超过±5℃