乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒

乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒

产品介绍：

AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱（Ach)水解，在神经传导调节中起重要作用。

测定原理：

AchE催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB)作用生成5-巯基-硝基苯甲酸（TNB)；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

检测原理：

酯水解反应：AchE催化乙酰胆碱水解生成胆碱和乙酸

比色法检测：常用硫代乙酰胆碱作为底物，水解生成的硫代胆碱与5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)（DTNB）反应生成黄色产物

检测波长：在412nm波长下测定黄色产物的吸光度，吸光度与AchE活性正相关

反应条件：最适pH为7.0-8.0，最适温度为37℃
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到620nm和510nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

直链淀粉标准曲线：将直链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线

支链淀粉标准曲线：将支链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线样本测定：取0.1mL待测样本，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度