苹果酸合酶(MS)测试盒

苹果酸合酶(MS)测试盒

产品介绍：

苹果酸合酶（MS，EC 4.1.3.2)是属于转移酶中酰基转移酶的一类，主要存在于植物和微生物中。MS是乙醛酸循环的关键酶之一，在MS催化下乙醛酸与乙酰辅酶A反应生成苹果酸。

测定原理：

MS催化乙酰CoA和乙醛酸产生苹果酸，同时生成辅酶A，辅酶A使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在 412nm处有特征吸光值。

需自备的仪器和用品：

酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、和蒸馏水

检测原理：

缩合反应：MS催化乙酰辅酶A与乙醛酸缩合生成苹果酸

辅酶A检测：反应生成的辅酶A与DTNB反应生成黄色产物，通过412nm波长下的吸光度变化定量MS活性

乙醛酸循环：MS是乙醛酸循环的关键酶，参与植物种子萌发期间的脂肪代谢

样本适用性：主要用于植物种子、幼苗等样本的检测
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到620nm和510nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

直链淀粉标准曲线：将直链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线

支链淀粉标准曲线：将支链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线样本测定：取0.1mL待测样本，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度