脂质过氧化物(LPO)测试盒

脂质过氧化物(LPO)测试盒

产品介绍：

脂质过氧化是动植物体内活性氧(ROS)氧化生物膜的过程，脂质过氧化物（LPO)是脂质过氧化过程的产物，即ROS与生物膜的磷脂、酶和膜受体相关的多不饱和脂肪酸的侧链及核酸等大分子物质起脂质过氧化反应形成LPO，使细胞膜的流动性和通透性发生改变,最终导致细胞结构和功能的改变。因此，LPO常被作为机体氧化应激的一种指标，与某些疾病的病理过程，如肿瘤、化学中毒、感染、炎 症、自身免疫疾病、动脉粥样硬化（AS)及心脑血管疾病，以及衰老等生理过程密切相关。

测定原理：

LPO在酸性条件下加热，产生小分子终产物MDA，MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在535nm有最大吸收峰。

需自备的仪器和用品：

酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

硫代巴比妥酸(TBA)法：脂质过氧化物分解产生的丙二醛（MDA）与TBA反应生成红色复合物

检测波长：在532nm波长下测定红色复合物的吸光度，吸光度与LPO含量正相关

荧光法：MDA与TBA反应生成的复合物具有荧光特性，通过测定荧光强度可提高检测灵敏度

氧化损伤指标：LPO含量可作为细胞氧化损伤的重要指标，常用于研究衰老、疾病发生机制等
公司正在出售的产品：

操作步骤：

比色法/分光光度法操作仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到550nm，蒸馏水调零试剂配制：

试剂二：临用前加入10mL蒸馏水充分乳化备用

试剂三：临用前加入20mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入试剂三100μL，摇匀，室温放置10min

记录550nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将油酸标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，同样处理，测定550nm处的吸光值，绘制标准曲线

荧光法操作仪器预热：荧光分光光度计/酶标仪预热30min以上，设置激发波长355nm，发射波长460nm试剂配制：

试剂二：临用前稀释至合适浓度备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴10min，立即测定荧光强度F空白和F测定标准曲线绘制：将荧光标准品稀释成0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μmol/L系列浓度，同样处理，测定荧光强度，绘制标准曲线

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度