线粒体呼吸链复合体Ⅱ/琥珀酸辅酶Q还原酶测试盒

线粒体呼吸链复合体Ⅱ/琥珀酸辅酶Q还原酶测试盒

产品介绍：

线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同时辅基FAD还原为FADH2，后者进一步还原氧化型辅酶Q生成还原型辅酶Q，是呼吸电子传递链的支路。

测定原理：

复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q可进一步还原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

底物脱氢催化原理：复合体 Ⅱ 催化琥珀酸脱氢，生成延胡索酸；氢经复合体 Ⅱ 传递给辅酶 Q。

人工电子受体显色原理：检测体系加入人工电子受体，接收电子后发生颜色变化，在固定波长下吸光度上升速率代表酶促反应速率。

底物空白校正原理：设置不加琥珀酸底物的空白管，扣除线粒体样本内源底物造成的本底反应速率。

活力归一化原理：记录单位时间吸光度变化值，结合摩尔消光系数、线粒体蛋白含量换算复合体 Ⅱ 酶活力。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

标准曲线绘制：

取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。

每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样本检测：

取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。

微量酶标仪法操作步骤

加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。

反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。

终止：每孔加入50μL终止液。

读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。