Na+k+ ——ATP酶测试盒

Na+k+  ——ATP酶测试盒

产品介绍：

Na+K+- ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。

测定原理：

Na+K+-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

离子依赖性酶促水解：Na⁺、K⁺、Mg²⁺共同作为辅酶因子，激活细胞膜 Na⁺‑K⁺‑ATP 酶水解 ATP，释放无机磷酸 Pi。

差减法特异性计算原理：设置总 ATP 酶管与 ouabain（哇巴因）抑制管；哇巴因特异性抑制 Na⁺‑K⁺‑ATP 酶活性；两管无机磷差值即为该酶水解产生磷含量。

钼蓝比色显色原理：游离无机磷与钼酸盐显色生成蓝色复合物，测吸光度，对照磷标准曲线得到 Pi 生成量。

酶活换算原理：根据反应时间、样本蛋白浓度，换算出每毫克蛋白每小时水解 ATP 生成无机磷的量作为酶活力单位。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定