土壤全磷含量测定

商品属性：

商品介绍：

土壤全磷包括有机磷和无机磷，有机质中的有机磷可受土壤微生物的分解，转化为无机磷，可供植物吸收利用，土壤中磷素营养状况影响作物的产品和质量，而土壤的全磷主要来之土母质和施用的肥料，反映了土壤潜在的供磷能力。

测定原理

混合酸高温消解土壤样品，采用钼锑抗比色法测定样品中的磷含量。

自备实验用品及仪器

消解仪、消化管、天平、烘箱、100目筛、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液管、浓硫酸、高氯酸。
检测原理：

前处理消解原理：土壤样品经浓硫酸‑高氯酸高温消解，土壤中各种结合态磷全部转化为可溶性正磷酸根。

显色反应原理：酸性条件下磷酸根与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，再被抗坏血酸还原生成蓝色磷钼蓝。

光谱检测原理：磷钼蓝蓝色络合物在 700 nm 波长比色检测吸光度。

定量计算原理：磷酸二氢钾标准溶液绘制标准曲线，扣除试剂空白，换算为每千克风干土壤中全磷质量。
样本前处理方法：

植物组织样本取样：称取0.1g样本，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆离心：11000g，4℃离心10min，弃沉淀取上清，置冰上待测

血清/血浆样本采集：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20°C，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻处理：直接检测。

细胞/微生物样本收集：先收集微生物或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照微生物或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万微生物或细胞加入1mL提取液），超声波破碎微生物或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

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测定操作步骤：

标准曲线绘制：

取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。

每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样本检测：

取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。

微量酶标仪法操作步骤

加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。

反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。

终止：每孔加入50μL终止液。

读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。