土壤木质素过氧化物酶(SLiP)测试盒

商品属性：

商品介绍：

木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

测定原理

木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛，在310nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板)。
检测原理：

酶促反应原理：以 H₂O₂为电子受体，木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛；不需要 Mn 离子参与。

显色反应原理：藜芦醛在紫外区有特征吸收，无需额外显色剂。

光谱检测原理：产物藜芦醛在 310 nm 紫外波长检测，吸光度增量和产物生成量成正比。

定量计算原理：空白扣除过氧化氢自发氧化；以每分钟每克干土引起 310 nm 吸光度变化值定义酶活单位。
样本前处理方法：

动植物组织样本取样：按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

细胞/微生物样本收集：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照细菌或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

血清/血浆样本

血清(浆)样品：直接检测

食品/饲料样本提取：称取适量样本，加入提取液，振荡提取30min离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

公司正在出售的产品：

测定操作步骤：

比色法/分光光度法操作仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到550nm，蒸馏水调零试剂配制：

试剂二：临用前加入10mL蒸馏水充分乳化备用

试剂三：临用前加入20mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入试剂三100μL，摇匀，室温放置10min

记录550nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将油酸标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，同样处理，测定550nm处的吸光值，绘制标准曲线

荧光法操作仪器预热：荧光分光光度计/酶标仪预热30min以上，设置激发波长355nm，发射波长460nm试剂配制：

试剂二：临用前稀释至合适浓度备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴10min，立即测定荧光强度F空白和F测定标准曲线绘制：将荧光标准品稀释成0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μmol/L系列浓度，同样处理，测定荧光强度，绘制标准曲线

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度