海藻糖6磷酸酯酶(TPP)测试盒

海藻糖6磷酸酯酶(TPP)测试盒

产品介绍：

海藻糖又称为漏芦糖、蕈糖，是由两个葡萄糖分子组成的一个非还原性双糖，能够在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面形成独特的保护膜，有效地保护生物分子结构不被破坏，从而维持生命体的生命过程和生物特征。

植物体内主要以葡萄糖为底物合成海藻糖，海藻糖-6-磷酸酯酶 （trehalose 6-phosphate phosphatase，TPP）是该途径中海藻糖合成关键酶之一，该反应首先在海藻糖-6-磷酸合成酶（trehalose-6-phosphate synthase，TPS）的作用下，催化尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）和 6-磷酸葡萄糖生成中间产物6-磷酸海藻糖，再在TPP的作用下去磷酸化，生成海藻糖。

测定原理：

TPP催化海藻糖-6-磷酸产生海藻糖，同时释放出磷酸根，使用钼锑抗比色法测定。

需自备的仪器和用品：  

酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

去磷酸化催化：TPP 催化海藻糖‑6‑磷酸水解，脱去磷酸基团生成海藻糖与无机磷 Pi。

无机磷显色反应：释放的无机磷与钼酸铵‑抗坏血酸试剂反应生成蓝色磷钼蓝复合物。

可见光比色检测：700 nm 波长测定蓝色产物吸光度，无机磷含量越高颜色越深。

酶活速率计算：测定单位时间 Pi 生成量，换算得到 TPP 水解活性。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到620nm和510nm，蒸馏水调零标准曲线绘制：

直链淀粉标准曲线：将直链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线

支链淀粉标准曲线：将支链淀粉标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，各取0.1mL，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值，绘制标准曲线样本测定：取0.1mL待测样本，加入0.9mL碘试剂，摇匀后测定620nm和510nm处的吸光值

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度