半乳糖醛酸含量测试盒

商品属性：

商品介绍：

果胶是一类广泛存在于植物细胞壁的初生壁和细胞中间片层的杂多糖。半乳糖醛酸是果胶酸的组成单位，也是果胶的主要成分，存在于植物的粘液、树胶和细菌多糖中。

测定原理

半乳糖醛酸在70℃下与浓硫酸反应生成5-甲酰基-2-呋喃甲酸，5-甲酰基-2-呋喃甲酸与3,5-二甲基苯酚反应产生有色物质，在450nm下有最大吸光值。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、酶标仪、96孔板、恒温水浴锅、硫酸、蒸馏水。
检测原理：

酸水解释放原理：样本果胶多糖经酸解处理，释放游离半乳糖醛酸单体。

浓硫酸‑酚显色原理：半乳糖醛酸在强酸高温条件下脱水生成糠醛衍生物。

显色复合物检测原理：糠醛衍生物与间羟基联苯试剂反应生成粉红色有色物质，520nm 比色。

半乳糖醛酸标准曲线原理：半乳糖醛酸标准梯度建立曲线，换算样本总半乳糖醛酸含量。
样本前处理方法：

‌一、组织样本‌

离体后立即液氮速冻，取0.1g新鲜组织按1:10比例加入预冷提取液。

冰浴条件下充分匀浆，超声破碎30次（功率20%，超声3s/间隔10s）。

8000g 4℃离心10min，取澄清上清置于冰上待测。

‌二、细胞/细菌样本‌

收集500万~1000万细胞，弃去培养基后加入1mL预冷提取液。

冰浴超声破碎，8000g 4℃离心10min，取上清待测。

三、液体样本‌

血清/血浆样本按1:10比例加入提取液，沸水浴振荡提取10min。

10000g常温离心10min，取上清冷却后待测。

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测定操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定